进行糖耐量试验的前几天，禁食高糖类食物，应以清淡饮食为主，试验前三天，每天摄入足够的碳水化合物两百克以上。禁止剧烈运动，因运动可加速患者机体的糖代谢，导致血糖水平发生改变，也不用绝对卧床。
在OGTT试验同时测定血浆胰岛素及C肽，目的是为了排除外源性胰岛素的影响，更确切了解胰岛β细胞的功能、协助糖尿病分型、判断病情严重程度及指导治疗。正常人空腹C肽浓度一般为0.3pmol/L到0.6pmol/L，C肽水平缺乏提示1型糖尿病，通常在0.2pmol/l以下。
正常人在空腹的状态下，C肽的正常值在500pmol/L左右，在进餐后C肽的值会升高，达到空腹状态的5-10倍，在临床上，C肽通常用来检查糖尿病，如果C肽值过低，则反应的胰岛功能降低，可能胰岛受损，判断有糖尿病的可能。
C肽偏低有这些情况：2型糖尿病患者，长期血糖控制不佳，导致自身胰岛功能减退或者受损，会导致C肽水平偏低；1型糖尿病或者其他类型的糖尿病，由于自身免疫、基因以及各种原因引起的胰岛功能免疫缺陷，出现胰岛素分泌绝对不足，由于胰岛素的减少导致胰岛素原裂解为C肽减少，所以会出现C肽偏低的现象。
血清c肽测定需要空腹，C肽为与胰岛素等分子的肽类物，它不受肝脏酶的灭活，仅受肾脏的作用而排泄。也就是，血中C肽的浓度可更好地反映胰岛β细胞的贮备功能。血清C肽测同胰岛素测定一样，也是判断糖尿病类型的重要方法，但较之胰岛素测定更为准确。
