目的 探讨悬浮培养联合表柔比星与传统无血清悬浮培养法在分离、富集人骨肉瘤干细胞上的效果差异，研究最佳培养方法，并鉴定相关肿瘤标志物表达。

　　方法 体外培养人骨肉瘤U2OS细胞和人骨肉瘤干细胞，免疫荧光检测人骨肉瘤干细胞球中CD105表达。以0、1.0、1.5、2.0、2.5和3.0?g/ml表柔比星处理人骨肉瘤干细胞球，并用cck8法测增殖活性。采用免疫印迹法检测不同浓度表柔比星处理后人骨肉瘤干细胞球中Nanog和Oct4蛋白表达。

　　结果 荧光显微镜下可见，人骨肉瘤干细胞球中部分细胞CD105呈阳性表达，提示成球的人骨肉瘤细胞有干细胞特性。cck8法检测结果显示，与未经表柔比星处理组比较，1.0、1.5、2.0、2.5和3.0ug/ml表柔比星处理组人骨肉瘤U2OS细胞生长抑制率明显增加(均p<0.05)。但2.5和3.0ug/ml表柔比星处理组抑制率无明显差异(p>0.05)。免疫印迹检测结果显示1.0、1.5、2.0、2.5ug/ml表柔比星处理组人骨肉瘤干细胞Nanog蛋白相对表达量呈递增趋势，2.5ug/ml表柔比星处理组Nanog蛋白相对表达量为1.052±0.012，明显高于未经表柔比星处理组。但2.5和3.0ug/ml表柔比星处理组Nanog蛋白相对表达量无明显差别(p>0.05)。同样，2.5ug/ml表柔比星处理组人骨肉瘤干细胞Oct4蛋白相对表达量为1.100±0.085，明显高于0、1.0、1.5、2.0ug/ml表柔比星处理组(均p<0.05)。但2.5和3.0ug/ml表柔比星处理组Oct4蛋白相对表达量无明显差别(p>0.05)。

　　结论 悬浮培养联合表柔比星较传统无血清培养，能更好的分离、纯化人骨肉瘤干细胞。2.5ug/ml表柔比星为分离培养人骨肉瘤干细胞的最适浓度，这将为近一步改善人骨肉瘤干细胞培养方法，提高富集人骨肉瘤干细胞效率提供充足的理论依据。

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