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热盐水试验

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热盐水试验介绍:

热盐水试验是利用热盐水对血细胞进行检查,用于检查细胞核溶解情况。

热盐水试验正常值:

细胞核不溶解、细胞形态清晰为阴性。

热盐水试验临床意义:

异常结果:检查结果为阳性。
在粒细胞系统中,中幼粒细胞以下各阶段细胞的大部分,细胞核被溶解而且程度明显(++-+++)。原始粒细胞的细胞核较少被溶解或不溶解,程度也轻(+-++)。早幼粒细胞细胞核溶解情况介于二者之间。淋巴与单核细胞一般不溶解,偶见轻度溶解(+)。以溶解(+)以上的幼稚细胞>10%为诊断界限。急性粒细胞诊断符合率达78.5%,而急性单核或淋巴细胞均不符合。有助于急性白血病细胞类型的鉴别。但幼稚细胞溶解(+)以下,<10%,不能完全排除急性粒细胞白血病。
需要检查的人群:有贫血、出血、感染、发热明显特征的人群。

热盐水试验注意事项:

不合宜人群:无。
检查前禁忌:检查前一天不吃过于油腻、高蛋白食物,避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检验结果。体检前一天的晚八时以后,应禁食。
检查时要求:
(1) 为保证获得完整的细胞核,第一是全程低温操作。第二是快速。第三,在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备细胞核的最关键环节。与组织块相比,培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁,因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
(2) 以离心力g计算正确的离心速度,不同的离心机可据此精确计算离心速度。
(3) 进行Western Blot和2D-胶电泳,可直接加入上样缓冲液裂解细胞核。

热盐水试验检查过程:

(1) 样本处理
① 组织匀浆:称取100-200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等,PBS或生理盐水冲洗,洗净血水,滤纸吸干,用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL预冷的Lysis Buffer,再加入50ul Reagent A , 0℃冰浴中上下研磨组织20次;有未研磨开的组织,可用双层纱布过滤。
② 培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800 × g 5-10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5 × 107个细胞,加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞,再加入50ul Reagent A,将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,0℃冰浴研磨细胞20-30次。
(2) 将组织或细胞匀浆物转移到1.5ml离心管中,4℃,700× g 离心5 min。细胞核沉淀在收集管底部,弃上清。加入0.5 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬沉淀;
(3) 取另一新离心管内加入0.5 mL Medium Buffer,吸取上一步的重悬液,沿管壁小心地加入到此离心管中,置于Medium Buffer之上,4℃, 700 × g 离心5min。将上清转移到新离心管,细胞核沉淀在管底;
(4) 弃上清,在细胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重悬细胞核沉,1000 × g 离心10min ,弃上清,得较纯的细胞核沉淀;
(5) 用50-100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬细胞核沉淀,立即使用或-70℃保存。

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